KROMATOGRAFI

KROMATOGRAFI

Kromatografi adalah kemampuan memisahkan molekul menggunakan karakteristik partisi dari molekul untuk tetap dalam fase diam versus fase gerak. Setelah molekul dipisahkan dari campuran, itu dapat diisolasi dan diukur. Kromatografi terbentuk apabila terdapat satu fasa diam dan satu fasa gerak. Fasa diam biasanya ialah padatan atau cairan dimana fasa gerak biasanya ialah cairan atau gas. Setiap molekul yang berbeda akan terserap kepada fasa diam dengan kekuatan yang berbeda. Pada waktu yang sama, dua molekul yang berlainan juga mempunyai kelarutan yang berbeda dalam fasa gerak.

Pemisahan Kromatografi

Komponen utama :

1.      Fase gerak:  mengalir melalui kolom dengan membawa analit.

·         Gas                  : Kromatografi Gas (GC)

·         Cair                 : Kromatografi Cair (LC), Kromatografi Lapis Tipis (TLC)

·         Supercritical fluid       : Kromatografi Supercritical Fluid (SFC)

2.      Fasa diam: tetap di tempat, tidak bergerak.

·         GC, LC ditempatkan dalam kolom

·         TLC, lapis dari sorben diatas plat.

3.      Pemisahan ini didasarkan pada partisi fase diam dan fase gerak

Terminologi Dasar Kromatografi

• Kromatograf   : Instrumen yang digunakan untuk suatu kromatografi.
• Fase diam        : Fase yang tetap ditempat didalam kolom. Dapat berupa particular padat atau gel (LC) atau berupa cairan sangat kental dibagian dalam kolom.
• Fase gerak       : Pelarut bergerak melalui kolom, baik cairan di LC atau gas di GC.

                        Eluent  : Cairan yang memasuki kolom.

                        Eluate  : cairan yang keluar dari kolom

• Elusi                : proses lewatnya fase gerak melalui kolom
• Kromatogram  : Grafik menunjukkan respons detektor sebagai fungsi dari waktu.
• Laju alir                       : berapa banyak fase gerak yang lewat/menit (mL/menit)
• Kecepatan linear: Jarak yang dilewati fase gerak per 1 menit di dalam kolom (cm / menit).

Kromatogram

Grafik menunjukkan respons detektor sebagai fungsi dari waktu elusi.

 

Waktu Retensi

Waktu yang diperlukan oleh sebuah komponen sampel untuk melintasi kolom sepanjang L disebut ‘retention time’ (t_r). Suatu pengukuran identitas

• adalah sama untuk semua senyawa.
• adalah terpanjang untuk senyawa yang tidak dipertahankan.
• adalah sama dengan waktu retensi mati.

Jenis- Jenis Kromatografi :

Liquid Liquid Chromatography (LLC)

LLC adalah kromatografi pembagian dimana partisi terjadi antara fase gerak dan fase diam yang kedua-duanya zat cair. Dalam hal ini fase diam tidak boleh larut dalam fase gerak.

Umumnya sebagai fase diam digunakan air dan sebagai fase gerak adalah pelarut organik. Misalnya pada kromatografi kertas, sebagai fase diam adalah air yang terserap pada serat selulosa dari kertas.

Liquid Solid Chromatography (LSC)

LSC adalah kromatografi penyerapan. Sebagai adsorben digunakan silika gel, alumina, penyaring molekul atau gelas berpori dipak dalam sebuah kolom dimana komponen-komponen campuran dipisahkan dengan adanya fase gerak. Kromatografi kolom dan kromatografi lapis tipis (TLC) merupakan teknik pemisahan yang masuk golongan ini.

Ion-exchange chromatography

Teknik ini menggunakan zeolitas, resin organik atau anorganik sebagai penukar ion. Senyawaan yang mempunyai ion-ion dengan afinitas yang berbeda terhadap resin yang digunakan dapat dipisahkan.

Analisa asam-asam amino adalah yang umum dilakukan dengan cara ini. Contoh lain adalah asam-asam nukleat dan analisis garam-garam anorganik.

Exclusion chromatography

Dalam teknik ini, gel nonionik berpori banyak dengan ukuran yang sama digunakan untuk memisahkan campuran berdasarkan perbedaan ukuran molekulnya (BM).

Molekul-molekul yang kecil akan memasuki pori-pori dari gel sedangkan molekul besar akan melewati sela-sela gel lebih cepat bila dibandingkan dengan molekul yang melewati pori-porinya. Jadi urutan elusi mula-mula adalah molekul yang lebih besar, molekul sedang, dan terakhir molekul yang paling kecil. Bila sebagai penyaring digunakan gel yang hidrofil (Sephadex) maka teknik ini disebut gel filtration chromatography dan bila digunakan gel yang hidrofob (polystyrene-divinylbenzene) disebut gel permeation chromatography.

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) atau High Pressure Liquid Chromatography (HPLC) merupakan salah satu metode kimia dan fisikokimia. KCKT termasuk metode analisis terbaru yaitu suatu teknik kromatografi dengan fasa gerak cairan dan fasa diam cairan atau padat.

KCKT dapat dipandang sebagai pelengkap Kromatografi Gas (KG). Dalam banyak hal kedua teknik ini dapat digunakan untuk memperoleh efek pemisahan yang sama membaiknya. Bila derivatisasi diperlukan pada KG, namun pada KCKT zat-zat yang tidak diderivatisasi dapat dianalisis. Untuk zat-zat yang labil pada pemanasan atau tidak menguap, KCKT adalah pilihan utama. Namun demikian bukan berarti KCKT menggantikan KG, tetapi akan memainkan peranan yang lebih besar bagi para analis laboratorium. Derivatisasi juga menjadi populer pada KCKT karena teknik ini dapat digunakan untuk menambah sensitivitas detektor UV Visibel yang umumnya digunakan.

KCKT menawarkan beberapa keuntungan dibanding dengan kromatografi cair

klasik, antara lain:

• Cepat: Waktu analisis umumnya kurang dari 1 jam. Banyak analisis yang dapat diselesaikari sekitar 15-30 menit. Untuk analisis yang tidak rumit (uncomplicated), waktu analisi kurang dari 5 menit bisa dicapai
• Resolusi : Berbeda dengan KG, Kromatografi Cair mempunyai dua rasa dimana interaksi selektif dapat terjadi. Pada KG, gas yang mengalir sedikit berinteraksi dengan zat padat; pemisahan terutama dicapai hanya dengan rasa diam. Kemampuan zat padat berinteraksi secara selektif dengan rasa diam dan rasa gerak pada KCKT memberikan parameter tambahan untuk mencapai pemisahan yang diinginkan.
• Sensitivitas detektor : Detektor absorbsi UV yang biasa digunakan dalam KCKT dapat mendeteksi kadar dalam jumlah nanogram (10-9 gram) dari bermacam- macam zat. Detektor-detektor Fluoresensi dan Elektrokimia dapat mendeteksi jumlah sampai picogram (10-12 gram). Detektor-detektor seperti Spektrofotometer Massa, Indeks Refraksi, Radiometri, dll dapat juga digunakan dalam KCKT
• Kolom yang dapat digunakan kembali : Berbeda dengan kolom kromatografi klasik, kolom KCKT dapat digunakan kembali (reusable) . Banyak analisis yang bisa dilakukan dengan kolom yang sma sebelum dari jenis sampel yang diinjeksi, kebersihan dari solven dan jenis solven yang digunakan
• Ideal untuk zat bermolekul besar dan berionik : zat – zat yang tidak bisa dianalisis dengan KG karena volatilitas rendah , biasanya diderivatisasi untuk menganalisis psesies ionik. KCKT dengan tipe eksklusi dan penukar ion ideal sekali untuk mengalissis zat – zat tersebut.
• Mudah rekoveri sampel : Umumnya setektor yang digunakan dalam KCKT tidak menyebabkan destruktif (kerusakan) pada komponen sampel yang diperiksa, oleh karena itu komponen sampel tersebut dapat dengan mudah sikumpulkan setelah melewati detector. Solvennya dapat dihilangkan dengan menguapkan ksecuali untuk kromatografi penukar ion memerlukan prosedur khusus.

Kerja Adalah Sebuah Kehormatan

Kerja Adalah Sebuah Kehormatan

Seorang pemuda yang sedang lapar pergi menuju restoran jalanan atau tepatnya pedagang kaki lima, dan ia pun menyantap makanan yang telah dipesannya. Saat pemuda itu makan datanglah seorang anak kecil laki-laki yang menjajakan kue kepada pemuda tersebut, “om mau beli kue om??” dengan ramah pemuda yang sedang makan tersebut menjawab “tidak dik, saya sedang makan”. Anak kecil tersebut tidaklah putus asa dengan tawaran pertama. Ia pun menawarkan kembali kuenya setelah pemuda tersebut selesai makan. Dan pemuda tersebut menjawab “tidak dik, saya sudah kenyang”. Setelah pemuda tersebut membayar ke kasir dan beranjak pergi dari warung kaki lima, anak kecil penjaja kue tersebut tidak menyerah dengan usahanya yang sudah hampir seharian menjajakan kue buatan bunda. Mungkin anak kecil ini berfikir “saya coba lagi tawarkan kue ini kepada om itu, siapa tau kue ini dijadikan oleh-oleh buat orang dirumah”. Ini adalah usaha yang gigih membantu bunda untuk menyambung kehidupan yang serba pas-pasan. Saat pemuda tadi beranjak pergi dari warung tersebut anak kecil penjaja kue menawarkan untuk yang ketiga kalinya kue dagangannya itu. “om mau beli kue saya, buat oleh-oleh orang rumah om??” pemuda yang ditawarkan jadi risih juga untuk menolak yang ketiga kalinya, kemudian ia keluarkan uang Rp. 2000 dari dompet dan ia berikan sebagai sedekah saja. “dik ini uang saya kasih, kuenya gak usah saya ambil, anggap saja ini sedekah dari saya buat adik”. Lalu uang yang diberikan pemuda itu ia ambil dan diberikan kepada pengemis yang sedang meminta-minta. Pemuda tadi jadi bingung, lho ini anak dikasih uang kok malah dikasihkan kepada orang lain. Pemuda itu pun bertanya kepada anak kecil tadi “kenapa kamu berikan uang tersebut kepada pengemis, kenapa tidak kamu ambil saja uangnya? Anak kecil penjaja kue tersenyum lugu menjawab “saya sudah berjanji sama ibu dirumah, ingin menjualkan kue buatan ibu, bukan jadi pengemis, dan saya akan bangga pulang kerumah bertemu ibu kalau kue buatan ibu terjual habis. Dan uang yang saya berikan kepada ibu hasil usaha kerja keras saya. Ibu saya tidak suka saya jadi pengemis”. Pemuda tadi jadi terkagum dengan kata-kata yang diucapkan anak kecil penjaja kue yang masih sangat kecil buat ukuran seorang anak yang sudah punya etos kerja bahwa “Kerja itu adalah Sebuah Kehormatan”, kalau dia tidak sukses bekerja menjajakan kue, ia berfikir kehormatan kerja dihadapan ibunya mempunyai nilai yang kurang. Suatu pantangan bagi ibunya, bila anaknya menjadi pengemis, ia ingin setiap ia pulang kerumah melihat ibu tersenyum menyambut kedatangannya dan senyuman ibu yang tulus ia balas dengan kerja yang terbaik dan menghasilkan uang. Kemudian pemuda tadi memborong semua kue yang dijajakan ank kecil tadi, bukan karena ia kasihan, bukan karena ia lapar tapi karena prinsip yang dimiliki oleh anak kecil itu “kerja adalah sebuah kehormatan”. Ia akan mendapatkan uang kalau ia sudah bekerja dengan baik.

Makna yang bisa diambil :

Kerja bukanlah masalah uang semata, namun lebih mendalam mempunyai sesuatu arti bagi hidup kita. Kadang mata kita menjadi hijau melihat uang, sampai akhirnya melupakan apa arti pentingnya kebanggaan profesi yang kita miliki. Bukan masalah tinggi rendah atau besar kecilnya suatu profesi, namun lebih penting adalah etos kerja, dalam arti penghargaan terhadap apa yang kita kerjakan . sekecil apapun yang kita kerjakan, sejauh itu memberikan rasa bangga didalam diri, maka itu akan memberikan arti besar.

Isolasi dan Identifikasi Senyawa Fenolik dari Kulit Akar Tumbuhan Artocarpus dadah Miq.

ABSTRAK

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA FENOLIK DARI

KULIT AKAR TUMBUHAN

Artocarpus dadah Miq.

Oleh

Indarto

Tumbuhan Artocarpus dadah Miq. merupakan salah satu spesies Artocarpus dari famili Moraceae yang termasuk tumbuhan langka di alam.  Tumbuhan ini dikenal sebagai sumber utama senyawa turunan fenolik yaitu senyawa flavon di atau tri-oksigenasi dan terisoprenilasi pada posisi C-3, dan juga dikenal sebagai sumber utama senyawa fenolik turunan flavonoid, aril-benzofuran, stilbenoid dan santon turunan flavonoida, yang memiliki aktivitas biologi sebagai promotor antitumor, antibakteri, antifungal, antiimflamatori, antikanker dan lain-lain.  Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa fenolik yang terkandung dalam tumbuhan A. dadah yang diperoleh dari desa Purwoasri, Kecamatan Metro Utara, Kota Metro, Provinsi Lampung.

Tahapan penelitian yang dilakukan meliputi pengumpulan dan persiapan sampel kemudian ekstraksi, isolasi, dan pemurnian senyawa menggunakan metode KCV, kromatografi flash, KKG, dan KLT, sedangkan identifikasi senyawa dilakukan menggunakan spektroskopi ultraungu-tampak (UV-VIS) dan inframerah (IR).  Pada penelitian ini telah berhasil diisolasi tiga senyawa, yang salah satunya diperkirakan senyawa flavonoid berdasarkan data spektrum UV-VIS dan IR yang juga memiliki aktivitas tinggi terhadap sel murine leukemia P-388 dengan IC₅₀ 3,1 μg/mL.  Berdasarkan data spektrum IR untuk dua senyawa yang lain terdapat serapan –OH pada daerah 3200-3500 cm^-1, serapan C=C aromatik di daerah 1600-1400 cm^-1, sehingga diperkirakan kedua senyawa tersebut merupakan senyawa golongan fenolik.

UJI KUALITATIF DAN KUANTITATIF GOLONGAN SENYAWA ORGANIK DARI KULIT DAN KAYU BATANG TUMBUHAN Artocarpus dadah Miq.

UJI KUALITATIF DAN KUANTITATIF GOLONGAN SENYAWA ORGANIK DARI KULIT DAN KAYU BATANG TUMBUHAN Artocarpus dadah Miq.

Indarto

Jurusan Kimia FMIPA Universitas Lampung, Bandar Lampung

ABSTRAK

Sekarang ini kimia tumbuhan atau yang dikenal dengan fitokimia telah berkembang menjadi suatu disiplin ilmu tersendiri, yang berada di antara kimia organik bahan alam dan biokimia tumbuhan, serta mempunyai kaitan erat dengan keduanya. Bidang perhatian fitokimia adalah aneka ragam senyawa organik yang dibentuk dan ditimbun oleh tumbuhan, yaitu mengenai struktur kimiannya, biosintesisnya, perubahan serta metabolismenya, penyebarannya secara alamiah, dan fungsi biologinya. Penentuan secara kualitatif dapat memberikan informasi keberadaan senyawa atau golongan senyawa tertentu, dan kuantitatif memungkinkan kita membedakan mana komponen utama dan mana komponen tambahan dalam campuran. Tumbuhan A. dadah Miq. merupakan salah satu spesies dari Artocarpus. Uji yang dilakukan secara kualitatif meliputi uji tanin, saponin, flavonoid, steroid, terpenoid, dan kardiak glikosida. Uji kuantitatif meliputi uji fenol total, alkaloid, tanin, dan flavonoid. Dari uji yang telah dilakukan, sampel kulit batang positif mengandung senyawa tanin, saponin, flavonoid, terpenoid, alkaloid, dan kardiakglikosida. Sedangkan sampel kayu batang positif mengandung senyawa tanin, saponin, flavonoid, steroid, terpenoid, dan alkaloid. Sedangkan uji yang dilakukan secara kuantitatif meliputi uji fenol total, tanin, alkaloid, dan uji flavonoid. Dari uji ini, kandungan dalam kulit batang sebesar 0.0529 % untuk fenol total, 27,7176 % tanin, 9,455 % flavonoid, dan 2,756 % alkaloid. Sedangkan dalam kayu batang sebesar 0,5555 % fenol total, 0,8987 % tanin, 3,312 % flavonoid, dan 0,694 % alkaloid.

Kata kunci : Fitokimia, Artocarpus dadah Miq.

PENDAHULUAN

Indonesia merupakan negara tropis yang kaya akan sumber daya alam terutama tumbuhan. Indonesia dikenal sebagai megabiodiversity terbesar kedua di dunia setelah Brasilia. Tumbuhan merupakan sumber bahan kimia hayati (chemical resources), sehingga biodiversitas dapat dipandang sebagai suatu industri atau pabrik bahan kimiawi yang berproduksi sepanjang tahun menghasilkan bahan kimia berguna (Chemical Prospectives) melalui proses rekayasa bioteknologi alami (Achmad dalam Ersam, 2001).

Sekarang ini kimia tumbuhan atau yang dikenal dengan fitokimia telah berkembang menjadi suatu disiplin ilmu tersendiri, yang berada di antara kimia organik bahan alam dan biokimia tumbuhan, serta mempunyai kaitan erat dengan keduanya. Bidang perhatian fitokimia adalah aneka ragam senyawa organik yang dibentuk dan ditimbun oleh tumbuhan, yaitu mengenai struktur kimianya, biosintesisnya, perubahan serta metabolismenya, penyebarannya secara alamiah, dan fungsi biologinya.

Pada semua pekerjaan tersebut diperlukan suatu metode pemisahan, pemurnian, dan identifikasi kandungan yang terdapat dalam tumbuhan yang memiliki sifat yang berbeda-beda dan juga memiliki jumlah yang banyak. Jadi, kemajuan pengetahuan kita mengenai fitokimia berkaitan langsung dengan keberhasilan memanfaatkan teknik yang sudah dikenal dan meneruskan pengembangan teknik baru untuk memecahkan suatu masalah baru yang menonjol (Robinson, 1995).

Senyawa kimiawi hasil isolasi dari tumbuhan banyak dimanfaatkan sebagai obat. Di indonesia spesies tumbuhan yang banyak dimanfaatkan sebagai obat salah satunya berasal dari famili Moraceae.

Moraceae merupakan suatu famili tumbuhan di alam yang merupakan produk dari keanekaragaman  hayati  di hutan tropik maupun subtropik. Salah  satu genus dari famili ini adalah Artocarpus. Di indonesia sendiri Artocarpus banyak dimanfaatkan sebagai ramuan obat tradisional, misalnya bunga dari A. communis dimanfaatkan untuk mengobati sakit gigi, abu dari daunnya digunakan untuk mengobati sakit kulit, dan bagian daunnya digunakan untuk mengobati pendarahan. Begitu juga dengan  kulit batang A. elastica yang digunakan untuk mencegah kehamilan, daunnya digunakan untuk obat tuberkolosis, sedangkan getahnya untuk obat disentri (Heyne, 1987 dalam Suhartati, 2001).

Tumbuhan A. dadah.merupakan salah satu spesies dari Artocarpus yang keberadaanya mulai langka di alam. A. dadah  ini merupakan tumbuhan yang endemik hanya di Indonesia dan masih sedikit sekali orang yang meneliti. Sehingga diperlukan uji fitokimia lebih lanjut mengenai kandungan senyawa organik yang terdapat dalam tumbuhan ini, dalam hal ini dikhususkan bagian kulit dan kayu batangnya.

BAHAN DAN METODE

Bahan

Bahan yang digunakan adalah serbuk sampel bagian kayu dan kulit batang tanaman Artocarpus dadah. Pelarut yang dipakai meliputi dietileter, etanol, etilasetat, metanol, aquades. Bahan kimia yang dipakai antara lain alumunium klorida 1%, ammonia encer, ammonium hidroksida pekat dan encer, asam asetat anhidrida, asam asetat glasial, asam klorida 1%, asam klorida 0,1 N, asam sulfat pekat, butanol, fenol, besi(III)klorida 0,1%, besi(III)klorida 0,1 M, kalium heksasianoferrat (III) 0,008 M, kloroform, minyak zaitun, tanin standar, pereaksi Meyer dan Wagner.

Metode

Uji Kualitatif

Tanin

Ke dalam gelas kimia dimasukkan sebanyak 0,5 gram serbuk sampel, kemudian ditambahkan 20 mL aquades lalu dididihkan dan disaring. Setelah itu 0,5 mL filtrat ditambahkan ferriklorida 0,1% dan diamati terjadinya perubahan warna.

Saponin

Ke dalam gelas kimia dimasukkan serbuk sampel sebanyak 2 gram, lalu ditambah dengan 20 mL aquades kemudian dididihkan lalu disaring. Diambil 10 mL filtratnya dan ditambahkan 5 mL aquades kemudian dikocok kuat hingga terbentuk busa. Lalu busanya ditambahkan 3 tetes minyak zaitun, setelah itu dikocok kembali dan diamati terbentuknya emulsi.

Flavonoid 1

Sebanyak 2 gram sampel dimasukkan ke dalam gelas kimia dan ditambah dengan 20 mL aquades kemudian dididihkan lalu disaring. 0,5 mL Filtratnya kemudian ditambah 5 mL ammonia encer dan 5 mL asam sulfat pekat dan diamati.

Flavonoid 2

Sebanyak 2 gram sampel dimasukkan ke dalam gelas kimia, lalu ditambah dengan 20 mL aquades kemudian dididihkan dan disaring. 0,5 mL Filtratnya ditambahkan 5 tetes aluminium klorida 1% dan diamati.

Flavonoid 3

Sebanyak 5 gram sampel dimasukkan ke dalam gelas kimia, lalu ditambahkan 10 mL etilasetat kemudian dididihkan dan disaring. 0,5 mL Filtratnya lalu ditambahkan 1 mL larutan ammonia encer, setelah itu diamati perubahannya.

Steroid

Ke dalam gelas kimia dimasukkan 2 gram sampel dan ditambah dengan 20 mL metanol yang mengandung 2 mL asam sulfat dididihkan dan disaring, setelah itu ditambahkan 2 mL asam asetat anhidrat, lalu diamati perubahannya.

Terpenoid

Ke dalam gelas kimia dimasukkan 2 gram sampel dan ditambahkan 10 mL etanol didihkan dan disaring, setelah itu diambil 5 mL ekstrak kemudian ditambahkan 2 mL kloroform dan 3 mL asam sulfat pekat, lalu diamati perubahannya.

Kardiak glikosida

Ke dalam gelas kimia dimasukkan 2 gram sampel dan ditambahkan 10 mL metanol dididihkan dan disaring, kemudian ditambahkan asam asetat glasial yang mengandung 1 tetes FeCl₃ 1 % dan juga ditambahkan asam sulfat pekat lalu diamati perubahannya.

Alkaloid

Sebanyak 3 gram sampel ditambah 10 mL larutan 0,05 N amonia-kloroform. Kemudian campuran dikocok selama satu menit, kemudian disaring kedalam tabung reaksi. Kepada filtrat tersebut ditambahkan 5 mL H₂SO₄ dan dikocok dengan teratur, didiamkan sampai terbentuk dua lapisan. Lapisan atas (fase air) dipisahkan dan diuji dengan pereaksi Meyer dan Wagner.

Uji kuantitatif

Uji fenol total

Sebanyak 2 gram sampel ditambah 300 mL dietileter, lalu disoklet selama 2 jam untuk menghilangkan lemaknya. Setelah itu sampel sampel bebas lemak tersebut ditambahkan 50 mL dietileter dan dididihkan selama 10 menit, kemudian disaring. 5 mL ekstraknya ditambahkan 10 mL aquades, 2 mL ammonium hidroksida pekat, dan 5 mL n-butanol, dikocok lalu didiamkan hingga terbentuk dua fase dan sampai timbul warna. Kemudian diukur serapannya dengan spektrofotometer ultraungu-tampak pada panjang gelombang 255 nm.

Tanin

Sebanyak 500 mg sampel dimasukkan ke dalam Erlenmeyer, lalu ditambahkan 50 mL aquades, diaduk dengan menggunakan pengocok mekanik selama 1 jam. Setelah itu larutan disaring dan dimasukkan ke dalam labu ukur 50 mL dan ditambahkan air hingga tepat tanda batas. Kemudian dipipet 5 mL filtrat ditambah 0,8 mL kalium heksasianoferrat(III) 0,008 M dalam 0,1 N asam klorida dan 0,8 mL ferriklorida 0,1 M dalam 0,1 N asam klorida. Kemudian didiamkan, setelah itu diukur serapannya dengan menggunakan spektrofotometer ultraungu-tampak pada panjang gelombang 420 nm.

Alkaloid

Ke dalam gelas kimia 250 mL, sebanyak 5 gram sampel ditambah 200 mL asam asetat 10% dalam metanol, lalu didiamkan selama 24 jam dan disaring. Kemudian dipekatkan dengan memanaskannya pada penangas air hingga volume menjadi ¼ volume awalnya. Setelah itu ditambahkan ammonium hidroksida pekat tetes demi tetes sampai terbentuk endapan sempurna. Larutan dibiarkan dan endapan tersebut dikumpulkan dan dicuci dengan ammonium hidroksida encer, lalu disaring dan dikeringkan lalu ditimbang beratnya.

Flavonoid

Dalam Erlenmeyer 10 gram serbuk sampel diekstrak dengan 100 mL metanol-air 80% pada suhu ruang selama 24 jam. Kemudian seluruh larutan disaring dan dipindahkan ke dalam krusibel. Lalu diuapkan hingga kering di atas penangas air kemudian ditimbang beratnya. 

HASIL DAN PEMBAHASAN

Uji Kualitatif

Tanin

Hasil uji tanin dari sampel kulit dan kayu batang dengan pereaksi FeCl₃ 0,1 % menunjukkan uji positif yaitu warna larutan menjadi kuning kehijauan untuk kulit batang dan cokelat kehijauan untuk kayu batang. Hal ini terjadi karena adanya reaksi reduksi. Tanin merupakan golongan senyawa polifenol, polifenol mampu mereduksi besi (III) menjadi besi (II) (Budini, 1980). Hal ini juga merupakan cara klasik untuk mendeteksi senyawa fenol, yaitu dengan menambahkan larutan besi(III) klorida 1% dalam air atau etanol pada larutan cuplikan menimbulkan warna hijau, merah, ungu, biru atau hitam (Harborne, 1987)

Tabel 1. Data hasil uji kualitatif

Uji	Kulit Batang	Kayu Batang
Tanin	+	+
Saponin	+	+
Flavonoid 1	+	+
Flavonoid 2	+	+
Flavonoid 3	+	+
Steroid	-	+
Terpenoid	+	+
Kardiak Glikosida	+	-
Alkaloid (Meyer)	+	+
Alkaloid (Wagner)	+	+

Saponin

Pada uji ini, 10 mL ekstrak sampel ditambah 5 mL akuades, kemudian dikocok hingga berbusa. Pada busa tersebut ditambahkan 3 tetes minyak zaitun kemudian dikocok kembali. Hal ini terlihat terbentuk emulsi dari kedua sampel tersebut. Hal ini menunjukan uji positif adanya senyawa saponin. Penambahan minyak zaitun disini sebagai sumber kolesterol, karena untuk memurnikan banyak saponin dengan menambahkan kolesterol, yang menyebabkan pembentukan senyawa kompleks adisi yang tidak larut dalam air (Robinson, 1995).

Uji Flavonoid 1

Dalam uji ini, 0,5 mL ekstrak sampel ditambah 5 mL amonia encer. Terlihat perubahan warna larutan menjadi agak kuning. Hal ini terjadi karena flavonoid termasuk dari senyawa fenol. Bila fenol direaksikan dengan basa akan terbentuk warna yang disebabkan terjadinya sistem konjugasi dari gugus aromatik (Markham,1988).

Uji Flavonoid 2

Sebanyak 0,5 mL ekstrak sampel kulit dan kayu batang setelah ditambahkan 5 tetes AlCl₃ 1 % sampel berubah menjadi kuning. Hal ini menunjukan uji positif adanya senyawa flavonoid dalam sampel. Suatu sampel yang mengandung flavonoid, bila direaksikan dengan AlCl₃ akan terbentuk warna kuning, hal ini terjadi karena terbentuknya senyawa kompleks antara flavonoid dengan AlCl₃ seperti pada Gambar 1 (Harborne, 1987).

Gambar 1. Kompleks AlCl₃ dengan flavonoid

Uji Flavonoid 3

Dalam uji ini sampel diekstrak dengan etiasetat, digunakannya etil asetat sebagai pelarut karena etil asetat merupakan pelarut yang baik untuk beberapa jenis flavonoid seperti katekin dan proantosianidin (Robinson,1995). Selain itu juga etilasetat merupakan pelarut yang baik untuk mendeteksi flavon dan flavonol (Harborne, 1987). Kemudian ekstrak sampel tersebut ditambah amonia encer, dan menghasilkan suatu larutan yang berwarna kuning kecoklatan untuk kulit batang dan warna kuning untuk kayu batang. Hal ini menunjukan uji positif adanya flavonoid.

Steroid

Sampel diekstrak dengan metanol yang mengandung 2 mL H₂SO₄, hasil ekstraksi tersebut kemudian ditambah dengan asam asetat anhidrat. Hasil yang diperoleh menujukkan terjadi perubahan warna larutan, untuk kulit batang warna larutan cokelat kemerahan dan kayu batang berwarna kuning kehijauan. Hal ini dapat disimpulkan bahwa sampel kulit batang menunjukan uji negatif dan kayu batang menunjukan uji positif. Uji positif adanya steroid apabila terjadi perubahan warna menjadi hijau atau biru, hal ini berdasarkan reaksi Liebermann-Buchard yang menyatakan bila suatu steroid direaksikan dengan asam asetat anhidrat dan setetes asam sulfat pekat akan menghasilkan warna hijau atau biru (Robinson, 1995).

Reaksi yang terjadi antara steroid dengan asam asetat anhidrat adalah reaksi asetilasi gugus –OH pada steroid. Sebagai contoh, senyawa 5a-Kolestan-3b, 6b-diol yang mengalami asetilasi pada gugus –OH pada C3, sehingga dihasilkan senyawa 3b-asetoksi-5a-Kolestan-6b-ol (Ahmad, 1986), reaksinya dapat dilihat pada Gambar 2 berikut :

a

                        b         

Gambar 2. a. senyawa 5a-Kolestan-3b, 6b-diol, b. senyawa 3b-asetoksi-5a-

                  Kolestan-6b-ol

Terpenoid

Pada uji ini, sampel diekstrak dengan etanol, kemudian filtratnya ditambahkan kloroform dan asam sulfat pekat. Hasil yang teramati terbentuk warna cokelat kemerahan pada antarmuka. Pada kulit batang warnanya lebih pekat dari kayu batang. Hal ini menunjukan dalam kedua sampel tersebut mengandung senyawa terpenoid (Odeoga, 2005).

Terbentuknya warna cokelat kemerahan pada daerah antarmuka karena ditambahkan pereaksi asam klorosulfonat atau pereaksi Brieskorn & Briner yang sering digunakan untuk membedakan secara khas triterpenoid yang berwarna merah dan senyawa steroid yang berwarna cokelat (Gerlach dalam Robinson, 1995) sehingga pada daerah antarmuka terlihat warna cokelat kemerahan.

Kardiak glikosida

Hasil ekstrak sampel dengan metanol ditambahkan asam asetat glasial yang mengandung 1 tetes FeCl₃ 1 % dan juga ditambahkan asam sulfat pekat. Dari reaksi tersebut terbentuk cincin cokelat kemerahan untuk kulit batang, sedangkan untuk kayu batang tidak terbentuk cincin berwarna. Hal ini menunjukan bahwa sampel kulit batang positif mengandung kardiak glikosida, sedangkan kayu batang menunjukan uji negatif.

Uji positif adanya kardiak glikosida adalah terbentuknya suatu lapisan cincin violet di bawah cincin cokelat dan akan nampak cincin hijau yang tipis, kardiak glikosida sendiri berada pada lapisan berwarna cokelat yang menunjukan adanya senyawa deoksi gula dan kardenolida.

Alkaloid

Dalam uji ini, sampel diekstrak dengan N-ammonia-kloroform kemudian disaring dan ditambahkan asam sulfat pekat yang tujuannya untuk menggaramkan alkaloid. Setelah itu dikocok sehingga terbentuk dua lapisan. Lapisan atas yang merupakan fase air diuji dengan pereaksi Meyer dan Wagner. Dari kedua uji ini menunjukan hasil yang positif, yaitu terbentuk endapan putih untuk uji Meyer dan endapan cokelat untuk uji Wagner.

Uji Kuantitatif

Tabel 2. Data Uji Kuantitatif

Uji	Kulit Batang	Kayu Batang
Fenol total	0.0529 %	0,5555 %
Tanin	27,7176 %	0,8987 %
Flavonoid	9,455 %	3,312 %
Alkaloid	2,756 %	0,694 %

Fenol total

Dalam uji ini, sampel disoklet terlebih dahulu dengan eter selama dua jam, hal ini untuk menghilangkan kandungan lemak yang ada dalam sampel. Lemak bersifat non polar sehingga digunakan pelarut eter yang juga non polar. Kemudian sampel bebas lemak dilarutkan kembali dalam eter dan ditambahkan NH₄OH dan n-butanol selanjutnya diencerkan dengan air, dikocok dan didiamkan hingga terbentuk dua fase. Fase organik dan fase air dipisahkan, fase air diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV/VIS pada panjang gelombang 255 nm. Sebelumnya disiapkan larutan standar fenol dengan konsentrasi 0, 10, 20, 40, 60 dan 80 ppm.

Dari hasil pengukuran dan dilakukan perhitungan, diperoleh kandungan fenol dalam sampel kulit batang sebanyak 1,058 mg atau 0,0529 % berat sampel. Sedangkan kandungan fenol total dalam sampel kayu batang sebanyak 1,111 mg atau 0,555 % berat sampel. Dari data tersebut dapat diketahui bahwa kayu batang mengandung senyawa fenol lebih banyak dari pada kulit batang.

Alkaloid

Dalam uji alkaloid ini, sampel dimaserasi dengan asam asetat 10 % dalam metanol. Hal ini bertujuan untuk mengekstrak alkaloid yang bersifat basa (Robinson, 1995). Hasil ekstrak ini kemudian dipekatkan hingga volumenya menjadi ¼ dari volume awal. Kemudian ekstrak tersebut dibasakan dengan menambahkan NH₄OH sehingga alkaloid tersebut akan mengendap. Fungsi dari penambahan NH₄OH adalah untuk mengendapkan alkaloid. Endapan tersebut dipisahkan dengan cara disaring dan  kemudian dikeringkan, setelah kering ditimbang beratnya. Dari hasil pengerjaan ini, diperoleh berat alkaloid untuk sampel kulit batang sebesar 0,1378 gram atau 2,756 % berat sampel. Sedangkan untuk sampel kayu batang sebesar 0,0347 gram atau 0,694 % berat sampel. Dari data tersebut dapat disimpulkan bahwa kandungan alkaloid dalam kulit batang lebih banyak dibandingkan dalam kayu batang.

Tanin

Pada uji ini, sampel dilarutkan dalam air dan dikocok dengan menggunakan pengocok mekanik selama satu jam. Kemudian disaring, 1 mL ekstrak diencerkan hingga 10 mL kemudian ditambahkan pereaksi besi(III) klorida 0,1 M dalam asam klorida 0,1 N, penambahan pereaksi ini dimaksudkan untuk mereduksi besi (III) menjadi besi (II). Setelah itu ditambahkan kalium heksasianoferrat(III) 0,008 M dalam asam klorida 0,1 N sehingga diperoleh larutan berwarna biru. Dalam hal ini, ion heksasianoferrat (III) mengoksidasi besi (II) menjadi besi (III) sehingga terbentuk heksasianoferrat (II).

Fe²⁺ + [Fe(CN)₆]^3- → Fe³⁺ +[Fe(CN)₆]^4-

Kemudian ion-ion tersebut bergabung membentuk endapan yang berwarna biru turnbull.

4Fe³⁺ + 3[Fe(CN)₆]^4- →  Fe₄[Fe(CN)₆]₃

                                                                                                (Svehla, 1985)

Sebelum dilakukan pengukuran absorbansinya, larutan tersebut didiamkan sampai endapan biru yang terbentuk mengendap semua sehingga akan mempermudah dalam pengukuran. Pada pengukuran ini juga disiapkan larutan standar tanin dengan konsentrasi 0, 100, 200, 300, 400, dan 500 ppm. Setelah preparasi sampel dan larutan standar selesai, kemudian diukur absorbansinya dengan Spektrofotometer UV/VIS pada panjang gelombang 420 nm.

Dari data yang diperoleh kemudian dilakukan perhitungan dengan persamaan regresi linear, sehingga diperoleh kandungan tanin dalam kuit batang sebesar 138,58 mg atau 27,7176% berat sampel. Sedangkan untuk kayu batang sebesar 4,4935 mg atau 0,8987% berat sampel. Dari data tersebut, terlihat bahwa kandungan tanin dalam kulit batang lebih banyak dari pada kayu batang.

Flavonoid

Dalam uji kuantitatif flavonoid, sampel dimaserasi selama 24 jam dengan metanol 80 %. Digunakannya metanol 80 % untuk maserasi karena metanol 80% merupakan pelarut yang paling baik dan paling sering digunakan untuk ekstraksi flavonoid (Robinson, 1995).

Ekstrak disaring dan diuapkan pelarutnya hingga kering, sehingga diperoleh padatan kering flavonoid. Padatan flavonoid tersebut kemudian ditimbang beratnya. Untuk sampel kulit batang diperoleh berat flavonoid sebesar 0,9455 gram atau 9.455 % berat sampel. Sedangkan untuk sampel kayu batang sebesar 0,3312gram atau 3,312 % berat sampel. Dari data tersebut, terlihat bahwa kandungan flavonoid dalam kulit batang lebih banyak dibandingkan dalam kayu batang.

KESIMPULAN

1.        Kulit batang Artocarpus dadah mengandung senyawa organik diantaranya senyawa tanin, saponin, flavonoid, terpenoid, kardiakglikosida, dan alkaloid.

2.        Bagian kayu batang Artocarpus dadah mengandung senyawa organik diantaranya senyawa tanin, saponin, flavonoid, steroid, terpenoid, dan alkaloid.

3.        Senyawa organik yang paling banyak terkandung dalam kulit batang adalah tannin, yaitu sekitar 138,58 mg atau 27,7176% berat sampel.

4.        Kulit batang Artocarpus dadah memiliki kandungan tanin, alkaloid, dan flavonoid lebih banyak dari pada kayu batang.

5.        Kandungan fenol total lebih banyak terdapat dalam kayu batang dari pada kulit batang.

DAFTAR PUSTAKA

Ahmad, S.A. 1986. Kimia Organik Bahan Alam. Penerbit Karunika Universitas Terbuka. Jakarta. Hal 65-73.

Ersam, T. 2004. Keunggulan Biodiversitas Hutan Tropika Indonesia dalam Merekayasa Model Molekul Alami. Makalah Seminar Nasional Kimia VI. Institut Teknologi Sepuluh November. Surabaya.

Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia. Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Alih bahasa Kosasih Padmawinata. ITB Bandung. Hal 1-107.

H. O. Odeoga, D. E. Okwu, and B. O. Mbaebie, Phytochemical constituents of some Nigerian medicinal plants, African Journal of Biotechnology Vol. 4(7), 685-688, 2005.

Markham, K.R. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Penerbit ITB. Bandung. Hal 1-173.

Robinson, Trevor. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Penerbit ITB. Bandung. Hal 71-285.

Suhartati, T. 2001. Senyawa Fenol Beberapa Spesies Tumbuhan Jenis Cempedak Indonesia. Disertasi. Penerbit ITB. Bandung.

Svehla, G. 1985. Buku Teks Analisis Anorganik Kualitatif Makro dan Semimikro. Alih bahasa Setiono dan Hadyana. PT. Kalman Media Pustaka. Jakarta. Hal 257.